蛋白质测定CDetermination of protein^ 用凯氏定氮 法先检测出全氮量,再以一定系数折算出蛋白质含量。也可 用重金属的碱式盐类与蛋白质形成沉淀,沉淀经消化后用 定氮法测定含氮量,并折算出蛋白质的含量。
咖啡碱测定CDetermination of caffeine^)测定方法有 重量法、定氮法、碘量法、比色法、紫外分光光度法等。其 中紫外分光光度法已被列为国家标准(GB 8312—87)。该 方法是直接用沸水提取咖啡碱,去除干扰物质,即得咖啡碱 水溶液,根据珈啡碱化学结构中隙吟和嚅嚏衍生物具有共 辆双链系统,强烈吸收260?290纳米紫外波段的性质,选 用特定波长274纳米即可测出其含量。方法简便,准确度 高。也可采用气相和液相色谱法,不但能准确、快速地检出 咖啡碱含量,同时还能检出含量较低的茶碱、可可
Ml啡破纯度检验 CDetermination of caffeine purityD 方法主要有两种:熔点测定,纯品如啡碱熔点为238C,可 采用熔点鉴定;含量纯度测定,一般可采用紫外分光光度法 测定。还可用薄层法或纸色谱法检验。此外,可用显微镜观 察其纯品形状。咖啡碱纯品应具有白色绢丝状光泽针状结 晶。感官上有味苦、无臭等特征。
茶多酬测定〔Determinatkm of tea polyphenolsD 根 据茶多酚易氧化、对某些试剂显色的特性,国内外常用高镒 酸钾滴定法(L6wenthal?Neubaur法)和比色法。前者是应 用靛红(指示剂)存在时高链酸钾对茶多酚氧化,根据高锭 酸钾氧化的消耗量计算茶多酚的含量,操作简便易行,但滴 定终点较难掌握,容易造成误差。后者是以酒石酸铁能与茶 多酚生成紫红色的络合物,显色强度与茶多酚含量成正比 的原理,计算出茶多酚含量。测定方法简便、快速、重现性 好。已被列为国家标准(GB 8313
儿茶素测定CDetermination of catechins^ 测定项目 分总量测定和组分测定。总量测定主要采用比色法,如香荚 兰素比色法。测定原理为:在强酸性条件下,儿茶素和香荚 兰素络合生成橘红到紫红色产物,其显色强度与儿茶素的 总量呈正比,可计算儿茶素的含量。该反应不受花青昔和黄 酮昔的干扰,是一种快速测定法,显色灵敏度高,最小检出 量可达0.5微克。此外,还有磷铝酸比色法、磺胺酸比色法 等。儿茶素组成测定常用高效液相色谱法,即利用高效液相 色谱仪,用紫外检测器测定各种儿茶素组成。该法操作简 便
酬酸类测定 CDetermination of phenolic acids〕 一般 采用色层分离法,包括纸色谱法、薄层层析以及高效液相色 谱法等。如用单相或双相纸色谱法测定茶没食子素、没食子 酸:在紫外层析灯下剪下显亮斑点,然后用鸨盐试剂或硝酸 银氨溶液显色定量。
绿原酸测定 CDetermination of chlorogenic acid〕 常 用高效液相色谱法测定。测定原理:茶叶中的绿原酸能用醋 酸水溶液提出,提出的绿原酸经C】8化学键合液相色谱柱分 离后,在327纳米处,用紫外检测器测定,用外标法定量即 可求出绿原酸的组成和含量。该法简便快速并可分离出茶 叶中的绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸。还可用薄 层层析分离后在薄层扫描仪上测定。
没食子酸测定〔Determination of gallic acid〕用纸色 谱法测定,基本原理为用纸色谱法分离没食子酸,然后用铛 盐试剂比色测定。亦可采用与儿茶素组成分析相同的分析 方法测定。
茶没食子素测定〔Determination of theogallinD 茶叶 中茶没食子素溶于热水,也溶于含水乙醇,提取液经双向纸 色谱法分离,然后在紫外灯下描出分离出的斑点并剪下,以 热水洗脱后,用磺胺酸试剂显色,比色测定其含量。
总糖测定 CDetermination of total sugar content J 茶 叶中的总糖量是指茶汤中的水溶性糖总量,包括还原糖和 水解转化糖。一般采用容量法和比色法测定。容量法包括铜 量法、碘量法、铜碘法等。检测原理:单糖内具有醛基、酮 基或彖基,在费林试剂或在碱性溶液中将高价铜还原为低 价铜,测出其氧化亚铜的量,即可折算出含糖量。比色法包 括意酮比色法、碑铝酸比色法等,是根据还原糖在一定的酸 碱条件下与糖的反应使试剂显色的作用,可定量测出其含 量。总糖量的测定以蕙酮比色法灵敏度较高,重演
淀粉测定〔Determination of starch〕 淀粉属于多糖 类的碳水化合物,因此样品前处理时,须用酸或酶先将淀粉 水解为葡萄糖(还原糖),而后再以测定总糖的步骤进行检 测。淀粉含量检测可采用单糖、二糖、淀粉系统测定法,同 时测定三种碳水化合物的含量。
粗纤维测定 CDetermination of crude fibred 茶叶粗 纤维属多糖类物质,其含量反映茶叶的老嫩度。检测方法主 要有重量法、托卡纤维测定仪法、近红外光谱法。其中重量 法已列为国家标准(GB/T 8310-87)o检测步骤:用硫酸 水解某些碳水化合物及其他有机物和部分矿物质,用碱溶 液去除脂肪、半纤维及蛋白质,再用乙醇、乙醍去除色素、 树脂等,即可取得粗纤维。
oc.纤雉素测定〔Determination of a-cellulosej 通过 对a-纤维素含量的测定,能更准确地鉴定茶叶的老嫩度。 测定原理:a-纤维素不溶于17.5%的氢氧化钠溶液,而缶 ”纤维素等其他物质均能除去。具体方法参见GB/ T 8310—87O
果胶质测定〔Determination of pectin〕 果胶质是茶 叶中由糖代谢形成的高分子化合物,分为可溶于水的水溶 性果胶和不溶于水的原果胶。用重量法、容量法和比色法测 定。其中重量法是常用的检测方法。分别测出水溶性果胶和 原果胶质的含量,后按公式计算:总果胶质(%)=水溶性 果胶质(%) +原果胶质(%)。
茶叶色素测定〔Determination of pigments in tea3茶叶中的色素分脂溶性色素和水溶性色素,前者包括叶黄 素、叶绿素等不溶于水的色素。需经有机溶剂(乙醇、丙酮、 乙醵)萃取,然后采取比色分光光度法或柱色谱法检测;后 者包括茶黄素、茶红素、茶褐素、花青素、黄酮类等,可直 接用热水萃取,再以有机溶剂分离,然后分别以特定显色剂 发色,根据显色强度以标样或溶剂作参比计算出含量。也可 用液相色谱以及近红外分析技术检测。
叶黄素测定 CDetermination of xanthophyllD 茶叶中 叶黄素属于类胡萝卜素,其测定一般采用类胡萝卜素分离、 定量同时进行,通过柱色谱法吸附分离各种色素,再以洗脱 剂将叶黄素洗脱,然后用分光光度法在叶黄素的特定波长 处测定并算出叶黄素的含量。
叶绿素总量测定〔Determination of total contents of chlorophyll 常用比色法和分光光度法。根据茶叶中叶绿 素不溶于水而溶解于有机溶剂的化学性质,以无水乙醇、丙 酮萃取样品中叶绿素,并进一步用乙醍等溶剂去除茶多酚 及有色干涉物,用分光光度法根据叶绿素的特定波长测出 叶绿素的含量。
叶绿素组成测定〔Determination of chlorophyll com- positionj 茶叶中叶绿素由叶绿素a和叶绿素b组成,具 有不同的吸收波长,因此可采用分光光度法分别测量并算 出叶绿素总量和叶绿素a、叶绿素b的含量。由于样品萃取 分离易受试剂、环境、温度的干扰,对精确度有一定影响。 用色谱法作定量检测比较精密。
茶黄素、茶红素、茶褐素测定〔Determination of thea- flavin> thearubigin and theabrownD 茶黄素(TF)、茶红 素(TR)、茶褐素(TB)是红茶汤色、滋味的重要成分,其 含量高低直接影响红茶品质。国内外通常均采用Roberts 法以及包括Flavognost试剂法和中茶所系统分析法在内 的改造方法进行测定。Roberts法是用乙酸乙酯(国内常 用)或甲基异戊酮(国外常用)萃取TF和部分TR (ST 型),SI型TR可利用碳酸氢钠分离,S1[型TR留于水
花青素测定〔Determination of cyanidinj 用分光光 度法检测。原理是根据茶叶中的花青素多以糖昔的形式存 在,花青昔在pH为1.0时,生成特有的刚果红,且不受黄 酮甘、儿茶素的干扰。该法只适用于鲜叶和绿茶中花青素的 分析,红茶则必须除去茶多酚的红色氧化产物后方能鉴定。 还可用纸色谱法测定。
黄IS类测定〔Determination of flavones〕 采用三氯 化铝比色法测定。原理:三氯化铝与黄酮类化合物作用后生 成黄酮的铝络合物,显黄色,其黄色深浅与黄酮量成正比, 可定量检测出黄酮类含量。
维生素测定CDetermination of vitamins^ 常用的有 吸收光谱法、动物及微生物试验方法、电极法以及利用维生 素本身的特殊化学反应,测定其含量。其中以吸收光谱法较 为简便。生物学方法较为复杂。还可用高效液相色谱法,结 果较正确,但前处理步骤较多。
维生素 B 测定 CDetermination of vitamin B〕 常用方 法有高效液相色谱法(HPLC)和瓦氏呼吸仪测定法。前者 利用VB的水溶特性提取分离,然后用HPLC测定,根据核 黄素在相应条件下所制的标准曲线,计算VB的含量。该法 测定结果正确性高,重现性好。后者需先将VB磷酸化成核 黄素刁-单磷酸酯(FMN),而FMN可以激活L-乳酸氧化 BI,使乳酸在有氧条件下氧化,通过测定耗氧的速率就可以 从FMN与O2的标准曲线上查到生成FMN的速率,从而 计算出Vb的含量。该法稳定性较好,但步