缝生素 C 测定 CDetermination of vitamin C〕 常用分 光光度法、微量滴定法。前者测定原理:Vc氧化成脱氢Vc 后,与2, 4-二硝基苯腓作用生成红色的臊,其光吸收值与 Vc含量成正比,据此可测出Vc的含量。后者为2, 6-二氯 靛酚滴定法:2, 6-二氯靛酚在酸性溶液中为红色,还原型 Vc可将其还原为无色,根据使用量可计算出Vc的含量。还 可用高效液相色谱法,其效果稳定可靠。
维生素 E 测定 CDetermination of vitamin E〕 常用荧 光法和高效液相色谱法。前者利用不同浓度的Ve在一定 测定条件下相应的荧光强度值所得标准曲线,即可计算出 Ve含量。后者则采用内标法,一次得到检验结果。
雄生素 U 测定 CDetermination of vitamin U〕 主要采 用高效液相色谱法。茶样经有机溶剂萃取,除去娜啡碱等干 扰物质后,即可选择适宜的色谱柱和洗脱液进行测定,从而 用外标法或内标法计算Vu的含量。其优点是可同时测定 几种成分,测定结果准确性高,重现性好。
胡萝卜素测定CDetermination of carotene^ 茶叶中 胡萝卜素含量较低,一般用色谱法定量,样品经前处理后进 行吸附分离,以有效洗脱剂洗脱,然后按胡萝卜素吸收波长 用分光光度法或光谱扫描仪进行定量。测试效果具有一定 的准确性,但不同的溶剂系统其分离效果差异较大。因此必 须注意溶剂混合比例、纯度,注意样品前处理吸附剂以及洗 脱剂的分离洗脱效果,才能准确测定出胡萝卜素的含量。
类胡萝卜素测定CDetermination of carotinoidD 类胡 萝卜素是一类具有黄色到橙红色的多种有色化合物,包括 胡萝卜素和叶黄素两大类,其检测分离定量的方法一般采 用色层分离扫描法。先分离出类胡萝卜素和叶绿素及其降 解产物,以外标物为参比,进行光谱扫描,计算各组分的含 量。同样也可用柱色谱法将类胡萝卜素分离,用分光光度法 定量,或进一步以高效液相色谱法检测类胡萝卜素各组分 的含量。
芳香物质检验 CDetermination of aromatic compo- nentsD 茶叶芳香物质是茶叶香气品质的物质基础,其组 成的不同体现了各类茶叶的香气风格。检验茶叶香气的高 低一般按感官审评评分和文字描述来反映香气品质。理化 检验的方法常用毛细管气相色谱技术检验。茶叶中的芳香 物质可用一定的提取方法提出并经浓缩后制得精油,该精 油通过毛细管气相色谱分离,并用色-质联用技术及标样定 性,可得茶叶香气组成和相对含量。茶叶香气的提取京法, 可采用同时蒸儒萃取法(SDE)、顶空分析法和超临界流体
芳耆物质定性检测〔Quantitative identification of aromatic components^ 常用方法:①与已知标准化合物对照 法,系气相色谱主要的、最可靠的方法之一,其定性的依据 是保留值(通常采用绝对或相对保留时间);②Kovats保留 指数定性法,Kovats保留指数受色谱条件影响较小,测定 值与文献值易于重复,便于利用文献值直接定性;③色-质 联用技术定性法,定性原理是:各种化合物在质谱中都有自 己独特的裂解规律,其质谱图可反映该化合物的指纹结构, 将样品的质谱图与标准
烟焦舞味检测(Determination of smoky-burnt odourD 可用气相色谱法。含有烟焦异味的茶叶属劣变茶,常发现 于炒青绿茶中。烟焦异味的主要化学物质为2, 5■二甲基毗 嗪、1H ■曲、荼和愈创木酚等化合物。根据其含量可确定 劣变程度。前处理用蒸慎萃取法,提取茶样中的烟焦异味物 质。经溶剂挥发后所得到茶叶精油,通过毛细管气相色谱分 离,并结合外标法定量,可计算出各烟焦味物质的含量。
茶叶卫生指标检验 Clnspection of tea hygienic norm?检验茶叶中农药残留量和有害重金属量的技术措施。按 照GB/T 5009. 57—1996茶叶卫生标准的分析方法执行。 其中两种农药残留量的测定采用气相色谱法,两种重金属 含量的测定采用原子吸收分光光度法。
放射性核素检验 CRadioactive element inspection^ 茶叶中的放射性物质来源于土壤、水、肥料及大气中放射性 物质的污染,在核衰变过程中产生a、伙7射线,危害人体 健康。商品茶中总放射性强度,经检验部门多年监测结果未 出现超标情况。茶叶放射性核素检验属于弱放射性测量,包 括总放射性(a、缶丫射线)测量和核素分析。检验采用三 种方法:放射化学法、y能谱法和a-能谱法。
农药残留量检验 CPesticide residue inspection^)世界 各茶叶产销国家都制定了农药残留限量标准和管理条例, 列为茶叶进出口贸易的必检项目。茶叶国家标准(GB/ T 9679-88)规定了六六六、滴滴涕两项含量指标、测定方 法及标准。城乡建设环境保护部和国家标准局于1985? 1993年先后以国家标准形式颁布五批茶叶中农药最高残 留限量标准,即 GB 4285—1987, GB 8321.1—1987, GB 8321. 2—1987, GB 8321. 3—1989, GB 8
重金含量检验 CHeavy metal content inspection^) 世界各茶叶产销国对于有害金属元素铜、锌、铅、镉、铭、 镰、锭等的含量均有严格的限制,其中铜、铅是必测项目。 检测方法参见“无机成分测定"及各种具体金属元素含量的 测定。
茶叶霉菌检验Clnspection of moulds in tea〕 茶叶因 受潮吸湿,或因外界环境及加工过程中的污染易滋生霉菌, 常见的品种有曲霉菌、青霉菌、黑曲霉、米曲霉、毛霉、蜡 叶披抱霉、互隔交链抱霉、新月弯抱霉、镰刀霉、簇弛匍柄 霉等。检验方法按GB 4789.15—1994食品卫生微生物检验 霉菌和酵母数测定执行,采用无菌水培养直接镜检计数法, 以每克茶叶或每毫升茶汤所含霉菌和酵母数表示。有些茶 类如茯砖茶、六堡茶、普洱茶等在制作过程中有一个“发 花”工艺,必须借助一些有益的微生物(如冠突曲
醯活性测定〔Detenniniktioii of enzyme activity^ 由 于酶具有高度的专一催化活性,故可通过测定其相应的底 物或产物浓度变化,或用某一反应产物或反应物浓度变化 来确定其酶的活性。一般采用电化学和光物理的方法,即利 用反应物或产物的吸光性,用紫外分光光度法或荧光法测 定。若酶反应过程中产物或反应物有气体,则可用测压仪 (瓦氏呼吸仪)测定。若反应过程中生成酸,则可用电化学 法。用同位素标记的底物则可用放射化学法测定底物浓度 变化,计算酶活性。一些性质稳定的酶,也可用高效液相色
多酬氧化藤活性测定 CDetermination of poly-phenolo- xidase activity^常用检压法和分光光度法。前者应用多酚 氧化酶(PPO)可催化儿茶素等底物在有氧条件下的氧化还 原反应,根据底物的氧化速率与单位酶浓度和单位时间内 的耗氧量成正比这一原理,用瓦氏呼吸仪测定反应过程中 的耗氧量求得PPO活性的大小,此方法设备简便,但操作 复杂,误差较大。后者利用邻苯二酚和D-儿茶素在PPO催 化下生成有色产物,其显色物质在460纳米处有最大吸收, 吸收值在单位时间内的变化和单位
多商氧化酶同工81 测定〔Detenninatioii of poly-phe- noloxidase isoenzyme^ 根据多酚氧化酶同工SI (PPOI)理 化性质,常用聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测。由于PPOI酶蛋 白表面所带电荷量、分子形状和大小不同,而聚丙烯酰胺凝 胶电泳在电泳过程中有电荷泳动效应和凝胶对样品分子的 筛选效应以及对样品的浓缩效应,从而使性质相同的PPOI 分子积聚在一定的区带。经染色、显色处理,显示出棕褐色 PPOI谱带。该方法设备简单,所需样品量少,分辨率高, 聚丙烯酰胺化学稳
过氧化氢醺活性测定〔DetermimUkm of catalaseac- tivityD 根据过氧化氢酶(PHD)能催化过氧化氢生成氧 的特性,常用碘量法和电极法。前者通过测定PHD催化 H2O2反应后剩余的H2O2与碘化物作用生成碘量的变化计 算PHD活性。该法设备简易,但操作复杂,误差较大。后 者的原理是H2O2为有电活性物质,但经PHD催化后其产 物为无电活性物质,用钳电极来测量PHD催化前后电流变 化引起电压的变化,测出PHD活性大小。还可应用分光光 度法、瓦氏呼吸仪检压法、硫酸高铀法等。
过氧化物醇同工醺测定CDetermination of peroxidase isoenzyme 3 国内外常用聚丙烯酰胺凝胶电泳法。其原 理与多酚氧化酶同工酶测定的原理相同,过氧化物同工酶 (PODI)的显色是经过催化联苯胺酰氢氧化。该方法可在 很广的pH范围内进行,所需样品量少、设备简便、分辨率
超氧化物歧化蘑活性测定〔Determhmtioii of superoxide dismutase activity^ 常用氧化硝基四氮哩蓝法 (NBT法)。根据超氧化物歧化酶(SOD)能催化超氧自由 基转化这一特点,在光照条件下,核黄素氧化四氮哩蓝成蓝 色化合物,而SOD可抑制这一反应,从单位时间内抑制 NBT光化还原50%光吸收值,即可计算出超氧化物歧化酶 活性的强度。
抗坏血酸氧化藤活性测定CDetermination of ascorbic acidoxidase activity^ 常用碘滴定法。抗坏血酸氧化酶能 催化抗坏血酸的氧化反应,用碘滴定过量的抗坏血酸,以标 准碘滴定反应前后的抗坏血酸,根据碘量计算单位时间内 房所催化的抗坏血酸量,从而求得酶的活性。该法设备简 易,显色强度大。还可用电量法,测定在一个电极上过量硫 代硫酸盐还原剩余碘量时电量的变化,然后计算酶的活性。
茶氨酸水解BI活性测定〔DetermiiMitioii of theanine hydrolase activity〕 依据茶氨酸水解酶能催化L-茶氨酸 水解反应的特性,用高效液相色谱法(HPLC)测定HPLC 能较好地分离酶促反应释放出的游离氨和乙胺,而氨和乙 胺可与邻苯二甲醛反应,生成溶解于乙酸乙酯的衍生物。用 HPLC即可测出衍生物量,从衍生物的多少可确定茶氨酸 水解酶的活性。该法误差小,但操作较复杂。
谷fit酸BKfiSI活性测定 CDetermination of glutamate dehydrogenase activity^ 常用分光光度法和紫外分光光度 法。前者应用的原理是谷氨酸脱氢酶(GDA)是催化谷氨 酸氧化产物a-酮戊二酸能与2, 4-二硝基苯骈生成黄色产 物,根据其在390纳米处吸收值的大小,即可计算出GDA 的活性。此法的优点是显色灵敏,操作简便,重现性好。但 此反应的可逆性强,故必须加过量烟酸酰胺腺噤吟二核昔 酸磷酸(NADP),并快速排出a-酮戊二酸。紫外分光光度 法可改变这个
苯丙氨酸脱氨酵活性测定〔Detemiiiation of nylalanine ammonia-lyase activity〕 国内外常用分光光度 法。根据苯丙氨酸脱氨产物肉桂酸在相应波长处具最大吸 收值的特点,测定单位时间里苯丙氨酸脱氨酶(PAL)催化 作用下肉桂酸吸光值的变化,从而计算出PAL活性的大 小。该法简便易行,PAL的稳定性较高,误差小,重现性 好。
酸性磷酸暮活性测定〔Determiimtion of acid phosphatase activity〕 常用分光光度法和荧光法。前者根据酸 性磷酸酶(AP)能分解磷酸苯酯成分的特性,用酚试剂测 定出在相应波长下酚的含量,并据此计算出酶的活性。该法 设备简易,但测定步骤较复杂。后者是根据酶解产生荧光底 物a-苯酸的速率与酶的浓度所作的校正曲线即可计算酶 活性含量。该法灵敏度高。亦可应用电化法测定。
硝酸还原藤活性测定〔Determination of nitrate reductase activity^ 常用比色法。即利用NO3和NO3—还原 生成的NO?—与重氮试剂FMNH或FADH偶联反应,生成 红色的重氮化合物,该物质在相应波长处具有最大的光吸 收,根据单位时间内光吸收值的变化可计算出硝酸还原酶 (NR)的活性强度,此法重现性好,设备简便,但操作较为 复杂。